Abritée au premier étage du Palazzo dei Diamanti, composée du Salone d’Onore et des appartements du XVIe siècle de Virginia de’ Medici, la Pinacoteca Nazionale di Ferrara offre une vision significative des œuvres d'artistes ferrarais du XIIIe au XVIIe siècle. La collection comprend les fresques médiévales provenant des églises de San Bartolo et de Sant’Andrea, en passant par les peintures du XVe siècle de Cosmè Tura et Ercole de’ Roberti, les œuvres du XVIIIe siècle de Scarsellino, Carlo Bononi et Guercino, jusqu'aux dessins de Gandolfi et Crespi. Aux côtés de ces chefs-d'œuvre de production locale, on trouve des œuvres de Gentile da Fabriano, Andrea Mantegna et Carpaccio. Depuis l'inauguration de la Pinacoteca en 1836, une grande partie de la collection a été enrichie par des œuvres provenant des églises dispersées sur le territoire, parmi lesquelles une série d'œuvres de Garofalo, qui en collaboration avec Dosso Dossi, a réalisé le complexe Polittico Costabili.