El Cenacolo di Sant'Apollonia se encuentra en el centro histórico de Florencia y se considera un tesoro del arte medieval florentino del siglo XIV.

El museo ocupa una parte del antiguo monasterio benedictino de Sant'Apollonia, fundado en 1339 y ampliado en el siglo XV.

Alrededor de 1447, Andrea del Castagno pintó al fresco la pared trasera del refectorio con la Última Cena, la Crucifixión, el Descendimiento y la Resurrección. El museo también exhibe otros frescos separados de Andrea del Castagno con las sinopías relacionadas y pinturas de Paolo Schiavo y Neri di Bicci, provenientes del monasterio.

En la pared sur de la sala hay un Crucifijo atribuido a Baccio da Montelupo y junto con otras obras del siglo XV del antiguo monasterio. En 1953 el desprendimiento de la parte superior de los frescos hizo posible la visión de la sinopia, o dibujos preparatorios, que hoy se pueden admirar en el lado opuesto de la sala.