L'œuvre a été créée entre 1594 et 1595 par le peintre Federico Barocci. La toile a été commandée par le dernier duc d'Urbino, Francesco Maria II Della Rovere, pour l'église d'Urbino du couvent des Capucins. Dans le tableau Saint François recevant les stigmates, nous décrivons le moment où saint François et Fra 'Leone, après s'être retirés en prière sur le mont La Verna, dans l'obscurité de la nuit, sont soudainement éblouis par la lumière flamboyante émanant du Christ crucifié en la ressemblance d'un séraphin (ange à six ailes). La lumière inonde principalement le Saint, représenté les bras ouverts alors qu'il reçoit les blessures aux mains, aux pieds et au flanc. Fra 'Leone est assis par terre à gauche, représenté dans le geste de protéger son visage de la violence de la lumière. En arrière-plan, la façade de l'église des Capucins d'Urbino émerge, qui est le décor de l'épisode biblique du meurtre d'Abel par Caïn devant un feu de joie. Le sujet avait déjà été abordé par Barocci dans d'autres œuvres, mais dans la peinture d'Urbino, le peintre est capable d'élargir davantage l'espace et de donner à la scène un souffle plus intense et une incisivité plus élevée. En plaçant le sujet la nuit, Barocci donne à la scène une émotion intense et crée l'une des scènes nocturnes les plus évocatrices de la peinture italienne.